Floresan mikroskobu, biyolojik örnekleri görselleştirme ve inceleme yeteneğimizde devrim yaratarak hücrelerin ve moleküllerin karmaşık dünyasını derinlemesine araştırmamıza olanak tanıdı. Floresan mikroskobunun önemli bir bileşeni, numune içindeki floresan molekülleri uyarmak için kullanılan ışık kaynağıdır. Yıllar boyunca her biri kendine özgü özelliklere ve avantajlara sahip çeşitli ışık kaynakları kullanıldı.
1. Cıva Lambası
50 ila 200 watt arasında değişen yüksek basınçlı cıva lambası, kuvars cam kullanılarak yapılmıştır ve küresel bir şekle sahiptir. İçerisinde belli miktarda cıva bulunur. Çalıştığında, iki elektrot arasında bir deşarj meydana gelir, bu da cıvanın buharlaşmasına neden olur ve küredeki iç basınç hızla artar. Bu işlem genellikle yaklaşık 5 ila 15 dakika sürer.
Yüksek basınçlı cıva lambasının emisyonu, elektrot deşarjı sırasında cıva moleküllerinin parçalanması ve azalmasından kaynaklanır ve bu da ışık fotonlarının emisyonuna yol açar.
Güçlü ultraviyole ve mavi-mor ışık yayar, bu da onu çeşitli floresan malzemeleri heyecanlandırmak için uygun hale getirir, bu nedenle floresan mikroskobunda yaygın olarak kullanılır.
2. Ksenon Lambalar
Floresan mikroskobunda yaygın olarak kullanılan bir diğer beyaz ışık kaynağı da ksenon lambadır. Cıva lambaları gibi ksenon lambalar da ultraviyoleden yakın kızılötesine kadar geniş bir dalga boyu spektrumu sağlar. Ancak uyarılma spektrumları bakımından farklılık gösterirler.
Cıva lambaları emisyonlarını ultraviyole yakın, mavi ve yeşil bölgelerde yoğunlaştırır; bu da parlak floresan sinyallerin üretilmesini sağlar ancak güçlü fototoksisiteyi de beraberinde getirir. Sonuç olarak, HBO lambaları genellikle sabit numuneler veya zayıf floresans görüntüleme için ayrılmıştır. Buna karşılık, ksenon lamba kaynakları daha yumuşak bir uyarılma profiline sahiptir ve farklı dalga boylarında yoğunluk karşılaştırmalarına olanak tanır. Bu özellik, kalsiyum iyonu konsantrasyonu ölçümleri gibi uygulamalar için avantajlıdır. Ksenon lambalar ayrıca yakın kızılötesi aralıkta, özellikle 800-1000 nm civarında güçlü uyarım sergiler.
XBO lambaları HBO lambalarına göre aşağıdaki avantajlara sahiptir:
① Daha düzgün spektral yoğunluk
② Kızılötesi ve orta kızılötesi bölgelerde daha güçlü spektral yoğunluk
③ Daha fazla enerji çıkışı, hedefin açıklığına ulaşmayı kolaylaştırır.
3. LED'ler
Son yıllarda floresan mikroskopi ışık kaynakları alanında yeni bir rakip ortaya çıktı: LED'ler. LED'ler milisaniyeler içinde hızlı açma-kapama avantajı sunarak numuneye maruz kalma sürelerini azaltır ve hassas numunelerin ömrünü uzatır. Ayrıca, LED ışığı hızlı ve hassas bir bozulma sergileyerek uzun süreli canlı hücre deneyleri sırasında fototoksisiteyi önemli ölçüde azaltır.
Beyaz ışık kaynaklarıyla karşılaştırıldığında LED'ler genellikle daha dar bir uyarılma spektrumu içinde yayılır. Bununla birlikte, çok yönlü, çok renkli floresans uygulamalarına olanak tanıyan çok sayıda LED bandı mevcut olup, LED'leri modern floresans mikroskobu kurulumlarında giderek daha popüler bir seçim haline getirmektedir.
4. Lazer Işık Kaynağı
Lazer ışık kaynakları son derece monokromatik ve yönlüdür; bu da onları STED (Stimulated Emission Depletion) ve PALM (Fotoaktif Lokalizasyon Mikroskobu) gibi süper çözünürlüklü teknikler de dahil olmak üzere yüksek çözünürlüklü mikroskopi için ideal kılar. Lazer ışığı tipik olarak hedef florofor için gerekli olan spesifik uyarılma dalga boyuna uyacak şekilde seçilir ve floresans uyarımında yüksek seçicilik ve hassasiyet sağlanır.
Floresan mikroskobu ışık kaynağının seçimi, spesifik deneysel gereksinimlere ve numune özelliklerine bağlıdır. Yardıma ihtiyacınız olursa lütfen bizimle iletişime geçmekten çekinmeyin
Gönderim zamanı: 13 Eylül 2023